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影响ELISA法检测丙肝抗体出现假阳性的因素分析

2015-02-02来源:未知 阅读: 【字号:
导读: 目的:探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测丙肝抗体(HCV-Ab)过程中存在假阳性的原因及解决方法。方法: 回顾性统计分析了36例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本,再采用聚合酶链反应(PCR)方法定量检测HCV-RNA进行确证试验,确定ELISA方法的假阳性率,并

赵治凤  贾秋龙(河南省新乡市传染病医院河南新乡453000)

【摘要】目的:探讨酶联免疫吸附法(ELISA)检测丙肝抗体(HCV-Ab)过程中存在假阳性的原因及解决方法。方法: 回顾性统计分析了36例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本,再采用聚合酶链反应(PCR)方法定量检测HCV-RNA进行确证试验,确定ELISA方法的假阳性率,并分析影响ELISA方法出现假阳性的因素及其解决方法。结果:ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本用PCR法检测HCV-RNA复检后28例仍为阳性,8例阴性,表明以PCR检测HCV-RNA 方法为准,ELISA法有77.8%的真阳性率,有22.2%的假阳性率。影响因素除了方法学、试剂盒本身之外,还有标本处理、操作不当等多种因素。结论: 多种因素可能会导致ELISA法检测丙肝抗体出现假阳性,除了严格操作、做好质控外,对可疑的假阳性的标本一定要认真复测,最好采用PCR检测HCV-RNA进行确证。

【关键词】酶联免疫吸附法(ELISA);丙肝抗体(HCV-Ab);聚合酶链反应(PCR);假阳性;因素

丙型肝炎 (Hepatitis C,简称丙肝)是有丙型肝炎病毒(HCV)引起的危害广大人群肝脏健康的一种传染性疾病,目前临床上把检测患者血清丙肝抗体(HCV-Ab)做为诊断丙肝的主要依据,酶联免疫吸附法(ELISA)因其灵敏度高、特异性强,是进行HCV-Ab的主要检测方法之一[1],但实验室在应用ELISA法检测丙肝抗体有许多因素可能会导致假阳性的结果[2],为此本文就回顾性统计分析了我院三年间35例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本,再采用聚合酶链反应(PCR)方法将ELISA方法检测的HCV-Ab检测HCV-RNA进行确证试验复检的结果,现报道如下:

1资料与方法

1.1一般资料:35例血清标本均来自2008年6月~2011年6月我院肝病科门诊和住院患者。

1.2方法

1.2.1仪器与试剂:HCV-RNA使用美国ABI7500实时荧光定量PCR扩增仪,测定试剂由上海科华生物技术有限公司提供;HCV-Ab使用北京普朗新技术公司酶免仪以及配套洗板机,试剂由上海科华生物技术有限公司提供。

1.2.2检测方法:抽取患者空腹静脉血3-5ml,离心分离血清后1-2h内先用ELISA方法检测的HCV-Ab,筛查出采用同种方法检测3次仍为弱阳性的血清标本,再用聚合酶链反应法将ELISA方法检测的HCV-Ab检测HCV-RNA加以证实。

1.2.3质控:所有试剂均在有效期内,全部仪器、设备运行状况良好,每日质控结果、每批测定阴阳对照均在可信范围,HCV-Ab每次参加河南省临检中心质控合格。

2结果

三年间36例用ELISA方法检测的HCV-Ab弱阳性血清标本,再采用聚合酶链反应(PCR)方法检测HCV-RNA进行确证试验复检的结果显示28例仍为阳性,8例阴性,表明以PCR检测HCV-RNA 方法为准,ELISA法有77.8%的真阳性率,有22.2%的假阳性率。

3讨论

目前,确定和临床广泛应用的HCV感染诊断方法有两大类:检测患者血清HCV-Ab和HCV-RNA,虽然最近也发展了丙肝抗原(HCV-Ag)检测技术,但尚未得到广泛应用。对血清(或者血浆)HCV-RNA的检测是目前唯一直接揭示存在的使用方法,但PCR也存在着技术复杂,要求特殊设备、费用高等缺点,难以在基层医院推广应用。血清HCV-Ab的检测主要有胶体金(GICA)和酶联免疫吸附(ELISA)方法,GICA法虽然快捷、方便,但存在灵敏度低,重复性差,不能提供准确的确定界限值的标准品,不能进行质控工作等缺点,仅可以做为初步筛查试验[3],而ELISA法具有较高灵敏度、特异性强、可进行定量和半定量测定等优点成为检测HCV感染的主要方法。

导致ELISA法检测血清HCV-Ab出现假阳性的原因多数报道认为[4-7]易受加样、反应温度、反应时间、洗涤彻底性等诸多因素的影响,根据我们工作体会认为以下几个方面是出现假阳性主要因素:标本溶血、被细菌污染、贮存时间过长和标本凝固不全等标本处理问题;试剂盒的抗原不纯、采用多克隆抗体和酶结合物纯度低等试剂盒本身问题;加样时间过长造成加样后放入恒温箱前等待时间过长,加样后孔壁上贴有微小血块加样等问题;洗板针堵塞,抽吸不完全,洗液量不足,洗板次数少等洗板问题。

总之, 影响ELISA法检测血清HCV-Ab出现假阳性因素除了方法学、试剂盒本身之外,还有标本处理、操作不当等多种因素,因此,我们检验人员在工作中应严格按照操作步骤进行操作,认真对待每一份标本,一定要做好检验前、检验中、检验后质控,尽可能降低人为因素造成的假阳性,对可疑的假阳性的标本一定要认真复测,尽可能用两种以上不同厂家试剂盒进行复检,最好采用PCR检测HCV-RNA进行确证。

参考文献

[1]洪秀华  临床微生物学检验 ,第1版【M】.北京:中国医药科技出版社,2004,385.

[2]张志梅,ELISA法检测丙肝抗体出现假阳性的分析,中国社区医师,2009,11(24):187

[3]王鹏,任美英,王树平,应用金标法检测抗-HCV假阴性和假阳性的结果分析 ,实用医技杂志, 2007,14(02):172-173

[4]郑岚 ,蒋黎敏, 方娴静 ,等,HBsAg,HCV抗体和HIV-1/2抗体胶体金检测法在急诊手术前的应用[J],现代检验医学杂志 ,2010 ,25(04):115-116.. 

[5]李朝献,酶联法检测丙型肝炎病毒抗体假阳性的原因分析,中国保健,2010,5:20-21 

[6]李金明,感染性疾病血清学检验中应重视对弱反应性标本的确认[J],中华检验医学杂志,2006,29(7):577-580 

[7]杨志栋 和殿峰-,ELISA法测丙肝抗体假阳性分析,中国中医药现代远程教育 2010,8(17):263-263

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