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一文教你读懂流式散点图和等高线图

2015-12-31来源:解螺旋 阅读: 【字号:
导读: 光信号是流式细胞仪的灵魂。流式细胞仪分析细胞的各种参数都是通过光信号来实现的。光信号包括了散射光信号和荧光信号。散射光信号可以用来反映细胞的大小和颗粒度等物理信息,包括前向角散射(forward scatter,FSC)和侧向角散射(side scatter, SSC),一
光信号是流式细胞仪的灵魂。流式细胞仪分析细胞的各种参数都是通过光信号来实现的。光信号包括了散射光信号和荧光信号。散射光信号可以用来反映细胞的大小和颗粒度等物理信息,包括前向角散射(forward scatter,FSC)和侧向角散射(side scatter, SSC),一般的流式细胞仪都具有这两个通道。而荧光信号可以用来反映反映细胞的抗原表达等化学特性。荧光通道的多少则是根据流式细胞仪的不同来确定的。这些特征都通过流式图来进行展示。

了解了流式细胞术的原理及荧光素的选择,要想读懂流式细胞术测出来的各种信息,我们必须知道如何读懂流式图。即使你不需要自己做流式,读懂流式图也是阅读文献不可或缺的技能。

流式图的种类非常多,最常用的是流式直方图和流式散点图,还有流式等高线图等。流式直方图只能显示一个通道的信息,而流式散点图和等高线图等则能同时显示两个通道的信息。

 FSC和SSC是流式中两个非常基本的参数,FSC的值能代表细胞的大小,细胞的体积越大,其FSC就越大。SSC则代表细胞的颗粒度,细胞不规则,细胞内细胞器和颗粒度越大,则SSC越大。所以可以利用FSC和SSC的特性对一些细胞进行区分,如人外周血的细胞,通过FSC和SSC就可以区分为三群(图1,图片来源于Google),该图属于流式细胞术中的散点图,即每一个点都代表了一个细胞。根据细胞大小和颗粒度的特征,可以把细胞分为淋巴细胞、单核细胞和粒细胞三群。在该图中,FSC越往右,其信号越强,说明细胞越大,如单核细胞和粒细胞就比淋巴细胞体积大。SSC越往上,说明细胞颗粒度越强,单核细胞和粒细胞的颗粒度也比淋巴细胞强。

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 “门”是流式中的一个重要概念,指的就是根据你的研究需要人为划定的一个区域。如图1种的方框。FSC和SSC也是流式分析中的第一道门,这两个通道反应的是细胞的物理特性,通常我们会根据细胞在这个门中的大体位置圈门再进行后续的分析。

流式的散点图在表示荧光信号的时候也具有非常重要的作用。如调节性T细胞的两个标志CD4和CD25(图2,图片来源于Google)

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X轴是CD4,越往右说明荧光越强。从图中可以看到X轴细胞分两群,一群是CD4+的细胞,一群是CD4-的细胞。Y轴是CD25,越往上说明荧光越强,从图中可以看到Y轴细胞也分CD25阳性和阴性两群。如果给图中的细胞往中间画个十字,就会出现四个象限,左上是CD4-CD25+,左下是CD4-CD25-,右上是CD4+CD25-,右下是CD4+CD25-。其中图A属于右上,即双阳性细胞。右图则是流式的直方图,红色的线对应的是左边的A门,蓝色的线对应的是左边的B门,越往右荧光越强。从右图可以看到A门中的细胞folate receptor 4这个抗原的表达比B门中的要强。右图中的纵坐标,是一堆的数字,它表示的是细胞的个数,比如横坐标上的某个荧光强度的点对应着多少个细胞。散点图和直方图的灵活组合可以展示很多信息。

流式的等高线图和散点图相似,都能代表两个通道的信息。等高线图和地理的等高线图原理相似,由相邻的点组合成闭合的环线。同一个环线上细胞的密度相同。地理上等高线越密集说明这个地方海拔变化越快。流式的等高线图如等高线越密集,说明这个地方的细胞数目密度变化越快。流式的等高线图比流式的散点图更能直观地体现细胞的分群。

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上图为外周血的FSC和SSC图(图3,图片来源于网络),和图1一致,展示的都是外周血的细胞分群。比淋巴细胞FSC更小的那一群为细胞碎片。最左边是黑白图,中间是伪彩图,右边是等高线图。从图中可看出来,黑白图较为简洁,伪彩图也能在一定程度上反映细胞的密集程度,在伪彩图中颜色越鲜艳的地方细胞密度最大,图中的红色部分为该图中细胞密度最大的地方。等高线图最为直观,等高线越密集细胞密度越大。 (责任编辑:admin)
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